Transformacja roslin i zwierzat.pdf

(1339 KB) Pobierz
Bombardment
Carnation
Zuker
et al.
(1999)
Floral
DiArabidopsis
thaliana
Clough
and
Bent
(1998)
Germinating
seed
imbibition
Arabidopsis
thaliana
Feldman
and
Marks (1987)
Direct
DNA
Delivery
PEG
Fusion
Tobacco
Krens
et al.
(1982)
Electroporation
Carrot
,Tobacco
,Maize
Fromm
et al.
(1985)
Microinjection
Tobacco
Crossway
et al.
(1986)
Gunpowder
Charge
Onion
Klein
et al.
(1987)
Electric
Discharge
Soybean
,Cotton
,Rice
McCabe
and
Christou
(1993)
Compressed
Air
Gun
Maize
,Rice
Oard
(1993)
Other
Methods
Tissue
Electroporation
Pea
Chowrira
et al.
(1995)
Laser
Rice
Guo
et al.
(1995)
Silicon
Carbide
Whiskers
Chlamydomonas
,Maize
Wang
et al.
(1995)
Adapted
from
Newell
(2000) http://
arabidopsis.info
students
agrobacterium
alternatives.html
METODY TRANSFORMACJI RO
LIN z przyk
ł adami
Method
oTransformation
Species
Used
Reference
Agrobacterium
Transformation
Wounding
with
Glass
Beads
Sunflower
Grayburn
and
Vick
(1995)
Wounding
by
788059022.008.png
Transformacja ro
ś li dwuli
ś ciennych z udzia
ł em
Agrobacterium
tumefaciens
bakterii naturalnie infekuj
cej
i powoduj
cej guzowato
ść
transformacja ro
ś lin poprzez
A.tumefaciens
: *
eby bakteria by
ł a onkogenna musi zawiera
ć plazmid Ti
(ang.
umor
i nducing
(najcz
ęś
ciej w miejscu zranienia) ponad 160 gatunk
w ro
ś lin
788059022.009.png 788059022.010.png
DNA
i region
virulence
do syntezy
opin
, kt
re s
ą dla niej
ł em C.
dwa regiony plazmidu Ti s
niezb
dne do powstania guza
Analiza genetyczna wykaza
ł a,
(Mutacje we
fragmencie
DNA
zmieniaj
ą morfologi
guza,
natomiast mutacje w regionie
zaburzaj
ą jego powstanie.)
DNA
zawiera geny zwi
ą zane z
produkcj
fitohormon
(auksyn,
cytokinin
, kwasu
indolilooctowego
). Nadprodukcja tych
hormon
w podwy
sza tempo podzia
ł u kom
rki, zapobiega
ónicowaniu i w rezultacie powoduje powstanie guza.
Inne geny
-DNA
odpowiedzialne s
ą za
syntez
aminokwas
i pochodnych cukrowych
zwanych
opinami
, oraz za ich
wydzielanie
z kom
rki ro
ś linnej.
Transformacja
-DNA
jest form
ą paso
ytnictwa, bakteria
zmusza ro
Fragment
plazmidu Ti przenoszony jest do kom
rki ro
ś linnej i
stabilnie integruje w genom. Zawarte w tym fragmencie geny
ulegaj
ą ekspresji w kom
rce ro
ś linnej.
Integruj
cy fragment
nazwano
DNA
( ransferred
DNA
788059022.011.png
Plazmid
Ti
nie
mo
by
ć bezpo
ś rednio
uyty
do
umo
liwi
ć regeneracj
normalnych
r ś lin
naturalny
plazmid
Ti jest
zbyt
du
(~200kb)
trudno
znale
źć
unikalne
miejsce
do
klonowania
,trudno
wyizolowa
ć DNA
ca
ł ego
plazmidu
Plazmid
Ti
klonowania
:musi
zosta
ć roz
bro
jony
przez
uszkodzenie
gen
produkcji
fitohormon
by
zawiera
geny
transformacji
geny
vir
wirulencji
*ORI
umo
liwiaj
ce
replikacj
wAgrobacterium
produkty
gen
vir
wycinaj
T DNA
zawarte
mi
dzy
LB i RB i
przenosz
jdo
genomu
r ś liny
http://
www.gmu.edu
departments
/mmb
baranova
/pages
ppt
/transgenic_plants2.ppt#260,15,Ti
Plasmid
Virulence region
Opine catabolism
ORI
-DNA
region
Tumor
producing
genes
788059022.001.png 788059022.002.png 788059022.003.png 788059022.004.png
wahad
ł owe
wektory
E.coli/A.tumefaciens
zaprojektowano
tak
,ewstawka
DNA
wycina
sprzy
uyciu
funkcji
vir
dostarczanej
itrans
przez
rozbrojony
plazmid
Ti
Binarny
system
plazmidowy
788059022.005.png 788059022.006.png 788059022.007.png
Zgłoś jeśli naruszono regulamin