Mikrobiologia przem. - lab 4,5 - Sprawozdanie.doc

Sprawozdanie z ćwiczeń 4 - 5

Produkcja kwasu mlekowego przez bakterie fermentacji mlekowej.

Przygotowali:

Agata Chodak

Justyna Cyba

Aleksandra Dawczyńska

Robert Gajowski

Grupa: chemia 1

1.Wstęp teoretyczny:

Charakterystyka bakterii z rodziny Lactobacteriaceae:

Wszystkie bakterie są gramdodatnie, nie wytwarzają endospor i wytwarzają kwas mlekowy. Są tolerancyjnymi beztlenowcami, nie wytwarzają katalazy i w większości pozbawione zdolności do aktywnego ruchu. Do wzrostu wymagają podłoży zawierających obok cukrów również aminokwasy i witaminy. Mają zdolność rozkładania laktozy. Bardzo rzadko występują w glebie lub w wodzie. Ich naturalnym siedliskiem są:

·         mleko oraz miejsce, w których powstają produkty mleczne;

·         zdrowe i gnijące rośliny;

·         układ pokarmowy oraz błony śluzowe ludzi i zwierząt.

Bakterie mlekowe mają ogromne znaczenie w przemyśle mlecznym, gdzie wykorzystuje się je ze względu na zdolności zakwaszania i nadawania smaku.

Szlak metaboliczny rozkładu glikozy na drodze:

a)      homofermentacji:

Glukoza

                            2 ADP                 NAD+

                                 2 ATP                                                                                     NADH+H+

                            2 kwas pirogronowy

                                                                                    NADH+H+

                                                                                    NAD+

                                       2 kwas mlekowy

b)     heterofermentacji:

2. Wyniki badań:

A.            Do 3 probówek z podłożem Ejkmana ( skład: pepton, NaCl, laktoza, woda destylowana, roztwór błękitu bromotymolowego) zaszczepiono:

a) kefir;

b) wodę z ogórków;

c) liofilizowaną kulturę bakterii;

Po inkubacji stwierdzono zmianę zabarwienia we wszystkich probówkach z zielonego na żółty. Nie stwierdzono obecność pęcherzyka gazu w rurce Durhmana.

Zmiana zabarwienia wywołana jest zmianą pH na odczyn kwaśny. Bakterie mlekowe jako źródło węgla wykorzystywały laktozę z podłoża Ejkmana, w wyniku czego wydzielił się kwas mlekowy. Brak pęcherzyków w rurce Durhmana świadczy o tym, że zaszła homofermentacja (nie wydzielił się CO2).

B.                 Wyniki barwienia Grama:

Wykonano preparat z wody z ogórków:

W preparacie były widoczne laseczki i ziarniaki.

Bakterie zaliczyliśmy do bakterii gramdodatnich.

C.                 Ocena jakości kiszonki z ogórków na podstawie pomiaru pH :

Wartość pH kiszonki zmierzona za pomocą papierka lakmusowego wyniosła: 3

Wg kryterium oceny mikrobiologicznej możemy ocenić kiszonkę jako bardzo dobrą.

D.                 Pomiar ilości rozłożonej glukozy metodą miareczkowania:

Z kultury wyjściowej bakterii z rodziny Lactobacteriaceae dodano 10 ml do butelki zawierającej 50 ml podłoża wzrostowego. Hodowle inkubowano prze tydzień w temperaturze 25°C. Podłoże powzrostowe odwirowano w temperaturze pokojowej w celu uzyskania osadu bakterii. Osad przepłukano wodą destylowaną i powtórnie odwirowano. Przygotowano 18 ml zawiesiny bakteryjnej. Do przygotowanej zawiesiny dodano kilka kropli błękitu bromotymolowego, 6 ml NaOH, aby dokonać zobojętnienia środowiska, następnie 3 ml glukozy i miareczkowano 0,01 M NaOH do momentu, w którym wskaźnik przyjmie barwę zielono-niebieską.

Wyniki zapisywano na karcie pomiarowej:

Ilość zużytego NaOH= 6,3 ml

Obliczamy ilość zużytej glukozy:

1 ml 0,01 M NaOH                            -              5μM zużytej glukozy

6,3 ml 0,01 M NaOH                            -              X

X=31,5 μM zużytej glukozy

Współczynnik fermentacji glukozy:

μM glukozy x min-1= 31,5 ...