SPRAWOZDANIE Z BIOCHEMII
Wyznaczanie parametrów kinetyki reakcji enzymatycznej
za pomocą metod polarymetrycznych.
Aleksandra Poczkaj gr Ch2
Aleksandra Gatlik gr Ch1
Agnieszka Kopeć gr Ch1
1. Cel ćwiczenia:
Wyznaczenie parametrów kinetyki reakcji enzymatycznej hydrolizy sacharozy - wartości stałej Km i Vmax.
2. Przebieg ćwiczenia:
Do kolby o pojemności 100 ml wsypano 4 gram sacharozy, a następnie dolano bufor octanowy (pH 4,7) do kreski i wymieszano do rozpuszcznia sacharozy, otrzymując roztwór 4%. Połowę zawartości roztworu przelano do osobnej kolby, do której dodano 200 µl inwertazy. Następne rozcieńczenia wykonywano poprzez uzupełnienie buforem octanowym kolby 100ml do kreski, przelewając 50 ml do kolejnej i dodając inwertazy. Tym sposobem stężenie zmniejszało się z każdym podejściem o połowę.
Otrzymano więc stężenia 4%, 2%, 1% i 0,5%.
Roztwory wprowadzano do rurki polarymetrycznej, uważnie lejąc by nie powstał pęcherzyk powietrza, aż do uzyskania wypukłego menisku. Rurkę polarymetryczną wprowadzano do polarymetru i następnie dokonywano pomiaru skręcalności optycznej co 2, 4, 6, 8 i 10 minut.
Obliczenia:
Stężenie substratu po czasie:
Cs=1,16*(alfa/L)+0,23*Co
Stężenie produktu:
Cp=Co-Cs
Alfa- kąt skręcenia światła spolaryzowanego w danej chwili[stopnie]
L- długość rurki polarymetrycznej – 2dm
Co- początkowe stężenie substratu[g/ml]
t
alfa
Cs
Co-Cs
Vo
1/Co
1/Vo
4%
0,3
5
3,82
0,18
23,20186
0,25
0,0431
2
4,5
3,53
0,47
4
4,2
3,356
0,644
6
3,4
2,892
1,108
8
3
2,66
1,34
10
2,4
2,312
1,688
2%
1,38
2,2
1,736
0,264
10,49318
0,5
0,0953
1,62
0,38
1,8
1,504
0,496
1,5
1,33
0,67
1
1,04
0,96
1%
1,1
0,868
0,132
7,272727
0,1375
0,81
0,19
0,7
0,636
0,364
0,6
0,578
0,422
0,45
0,491
0,509
0,404
0,596
0,50%
1,08
peroni69