STANOWISKO 3
Antybiotyki
Metoda break point- metoda stężeń granicznych, zakwalifikowanie drobnoustroju (O, W, ŚW) na podstawie zachowania się szczepu wobec 2 granicznych stężeń antybiotyku.
Mamy 5 płytek
Te dwie u góry to szczep wzorcowy. Mamy posiany ten sam szczep ale na dwóch płytkach wzorcowych.
3 pozostałe to różne stężenia antybiotyku w podłożu. Mamy posiane różne drobnoustroje, tam była krew, wymaz z…, plwocina
Jest taka sytuacja przy wzorcowej płytce że na czwórce nie rośnie nic. Jeżeli pani zapyta, dlaczego to nie rośnie należy odpowiedzieć: prawdopodobnie mógłby to być beztlenowiec, że hodowla była przeprowadzona w warunkach tlenowych w związku z tym nie spełniliśmy warunków dla tego drobnoustroju.
Jeśli mamy szczep wzorcowy- to jest szczep, o którym mamy pojęcie; w związku z tym sprawdzamy coś. W tym wypadku będziemy sprawdzać działanie antybiotyku. Sprawdzamy zgodnie z tabelkami, które są podane.
Mamy różne wymazy.
W przypadku Jedynki: stężenie: 0- wzrost; 8- wzrost; 16- wzrost WNIOSEK: Jest oporny
W przypadku, gdybyśmy sprawdzili wzrost naszego szczepu wzorcowego: ZGODNY/ NIEZGODNY. Dla Jedynki będzie niezgodny.
Nie powinniśmy wykonywać już tego badania, ponieważ antybiotyk nie spełnia wymogów.
Szczep wzorcowy to taki, o którym wiemy wszystko, on służy nam do kontroli czegoś (w przypadku antybiotyku sprawdzamy działanie antybiotyku, w przypadku leku sprawdzamy np. przydatność, żyzność podłoża.
Trójka: stężenie: 0- wzrost; 8- wzrost; 16- brak wzrostu. Średnio wrażliwy.
Jest to metoda „break point”.
Te liczby 1, 2, 3, 4- różne wymazy lub różne materiały biologiczne (to nas nie interesuje, interesuje nas tylko interpretacja break point).
Dwójka: wrażliwa, bo nie rośnie w żadnym.
MIC
Na przykładzie żółci.
MIC- najmniejsze stężenie hamujące wzrost drobnoustrojów
Najmniejsze stężenie, przy którym nie ma zmętnienia (nie ma wzrostu drobnoustrojów) to 8 μg/ml.
MIC= 8 μg/ml
Warto zaznaczyć, że metoda break point pozwoli nam tylko zaliczyć dany szczep do opornego, średnio wrażliwego i wrażliwego. Break point- metoda jakościowa.
MIC natomiast pozwala nam wyznaczyć najmniejsze stężenie hamujące, więc jest metodą ilościową.
MIARECZKOWANIE PENICYLINY
Chcemy zobaczyć jakie stężenie penicyliny znajduje się w surowicy pacjenta.
Roztworem badanym jest surowica pacjenta.
Szukamy najmniejszego rozcieńczenia, w którym nie ma wzrostu.
Mamy odpowiednie rozcieńczenia. Mamy roztwór 1:8 i 1:14.
To jest nasza surowica pacjenta:
Czyli będzie to 1:8, bo nie ma wzrostu.
Przechodzimy do roztworu wzorcowego, czyli do naszego szczepu:
Pierwsze stężenie, przy którym nie ma wzrostu to 0,0625. W takim razie mnożymy:
8 * 0,0625 = stężenie penicyliny w surowicy pacjenta.
Wiedzieć jaka jest zasada i jak to się przemnaża.
Krążek z napisem „FOX”- co to?
Jeden z nich jest oporny, drugi wrażliwy. Ta oporność świadczy o metycylinooporności, MRSA, MSSA.
Wykrywanie MRSA- szczepów Staphylococcus aureus opornych na metycylinę.
Świadczy to, że jest oporny na pewne antybiotyki- wszystkie β-laktamy.
Wykonujemy badanie poprzez wykonanie antybiogramu z krążkiem z cefoksytyną o stężeniu 30 μg.
Jeżeli jest strefa zahamowania wzrostu zgodna z tym co jest podane w tabelach to wtedy możemy powiedzieć, że mamy szczep oporny na wszystkie antybiotyki β-laktamowe. Charakterystyczne dla S. aureus.
(Wykonywaliśmy jeszcze takie posiewy z MRSA na podłożu chromogennym, ale na praktycznym tego nie ma).
Po lewej „uszy myszki Mickey”
Co to jest za mechanizm i który jest mechanizmem dodatnim?
Myszka Mickey nie jest dodatnia, bo wytwarza β-laktamazę o poszerzonym spektrum działania. Tutaj mamy użytą ampicylinę z kwasem klawulanowym. Kwas klawulanowy jest inhibitorem β-laktamaz, w związku z tym zaobserwujemy przy dodatnim mechanizmie ESBL dodatkową strefę zahamowania wzrostu od inhibitora.
Mamy zastosowane cefalosporyny III generacji i tutaj mamy ten słynny Augmentin.
Dodatkowa strefa zahamowania wzrostu świadcząca o ESBL. ESBL dodatni.
MECHANIZM MLSB
Jakie antybiotyki były stosowane do tego mechanizmu- erytromycyna i klindamycyna, czyli linkozamidy i makrolidy.
Jest to dodatni mechanizm MLSB (charakterystyczne „D”). indukcyjny
Trzeba jeszcze omówić czy jest strefa zahamowania wzrostu.
Płytka nie będzie podpisana jako MLSB. Musimy wiedzieć, że jak jest erytromycyna i klindamycyna to chodzi o ten mechanizm oporności.
Jest krążek z erytromycyną i klindamycyną i był schemat:
Jeśli jest wrażliwy na to i na to- możemy zastosować makrolidy i linkozamidy.
Jeżeli jest oporny na erytromycynę a wrażliwy na klindamycynę to wtedy możemy zastosować tylko linkozamidy
…………………………………………………………………………………………………………..
Musimy umieć te schematy.
Jeden krążek na środku- chodzi o MRSA.
Dwa krążki – MLSB
3, 4 krążki- ESBL
E-TEST
Metoda dyfuzyjna z użyciem pasków gradientowych.
Połączenie metody ilościowej i dyfuzyjnej.
Jest po pasek plastikowy wysycony antybiotykiem w gradiencie stężeń, który nakłada się na powierzchnię podłoża z wysianym szczepem.
Odczytujemy tu MIC, więc jest to metoda ilościowa.
Jak go odczytujemy? W miejscu przecięcia.
Na szczep wzorcowy, czyli sprawdzamy działanie antybiotyku. Każda seria antybiotyku musi zostać poddana kontroli, w związku z tym posiewamy płytkę … w skali MacFarlanda szczepem wzorcowym, nanosimy krążki pamiętając o zachowaniu zasady (przy tworzeniu antybiogramu) 3x15.
Posiewamy drobnoustrój, nanosimy krążki. Jeśli strefy zahamowania wzrostu są zgodne z tabelami podanymi przez EUCAST to wówczas możemy dopiero wykonać badanie szczepu właściwego i ocenić na podstawie stref zahamowania wzrostu czy jest oporny, wrażliwy czy średnio wrażliwy.
Jest to metoda jakościowa.
W metodzie tej istnieje gradient stężenia, bo jeżeli mamy położony krążek dyfunduje on do podłoża i wiadomo, że jego największe stężenie będzie w miejscu położenia krążka, ale my nie jesteśmy w stanie ocenić stężenia tego antybiotyku. Więc badamy jakość antybiotyku.
11
InzChemiczna